核酸污染去除劑
背景知識
由于核酸檢測步驟較多，且多個(gè)環(huán)節樣本直接暴露于空氣中，任何一個(gè)環(huán)節 出現一點(diǎn)小紕漏就容易導致整個(gè)實(shí)驗室的污染。即使嚴格按照規程操作，核酸污染依然無(wú)法徹底避免。
核酸污染主要體現在樣本核酸或擴增產(chǎn)物在臺面、設備、檢測人員表面的核酸殘留，以及擴 增產(chǎn)物形成的氣溶膠。氣溶膠由于顆粒較小，若不做處理可長(cháng)期漂浮在空氣中持續影響實(shí)驗室的檢測。針對固體表面的核酸殘留，很多實(shí)驗室采用75%乙醇或84 消毒液進(jìn)行擦拭處理。針對空氣中的氣溶膠污染，很多實(shí)驗室選擇乙醇噴霧使核酸沉降然后配合84消毒液處理地面及臺面，但效果不是太理想。因此迫切需要研發(fā)一種能夠快速將核酸氣溶膠沉降的物質(zhì)，將懸浮在空氣中的核酸進(jìn)行沉降，然后配合84消毒液處理地面及臺面。
原理
采用大分子吸附絡(luò )合原理吸附空氣中的氣溶膠，形成不溶物，并配合酶水解核酸片段，可有效的將存在與液體、空氣、物表上的核酸去除干凈。
效果評價(jià)
1) 84 消毒液和核酸污染去除劑可有效清除溶液中核酸
為驗證不同試劑對于溶液中核酸的清除效果，將5種不同試劑分別與RNA或DNA 溶液混合，瓊脂糖凝膠電泳鑒定核酸殘留。結果顯示，84消毒液和核酸污染去除劑能夠將溶液中的 RNA (圖 1A) 或 DNA (圖 1B) 完全清除干凈，DNA AWAY(ThermoFisher 公司核酸去除劑) 只能部分清除，洗滌劑對于核酸無(wú)影響。另外，核酸污染去除劑 處理的樣本電泳時(shí)在點(diǎn)樣孔中可見(jiàn)核酸條帶，離心處理后核酸條帶消失。提示核酸污染去除劑與溶液中的核酸形成了不溶物，與該產(chǎn)品的核酸清除原理符合。84消毒液處理的樣本不管離心與否均未見(jiàn)到核酸條帶，提示溶液中核酸已降解。
圖 1 瓊脂糖電泳鑒定不同試劑對溶液中RNA和DNA的清除效果
2）84消毒液和核酸污染去除劑可清除固體表面核酸
為驗證不同試劑對于塑料、玻璃和金屬表面核酸殘留的清除效果，將陽(yáng)性PCR產(chǎn)物滴在不同 材質(zhì)上晾干模擬核酸殘留，分別用 5 種不同試劑對3種材質(zhì)表面的核酸殘留進(jìn)行去除操作，然后采集處理點(diǎn)的殘留核酸進(jìn)行熒光PCR 鑒定。結果顯示，84消毒液和 核酸污染去除劑能夠較好地清除掉不同材質(zhì)表面的核酸殘留，DNA AWAY也對核酸殘留具有一定清除效果，但稍遜于前兩種試劑，而水和乙醇結果相似，均不能明顯去除核酸殘留，僅比對照組Ct值略高。另外，金屬表面的核酸殘留最容易被清除干凈，玻璃次之，塑料表面的核酸殘留最不易被清除干凈 (圖2)。提示塑料材質(zhì)實(shí)驗臺表面的核酸殘留要多次清理才能達到預期，可考慮將兩種試劑交替使用以達到最好的處理效果，另外建議在金屬臺面進(jìn)行核酸檢測相關(guān)操作。
圖 2 熒光PCR鑒定不同材質(zhì)表面核酸殘留去除效果
3）核酸污染去除劑配合84消毒液可清除模擬核酸氣溶膠污染
實(shí)驗室的核酸氣溶膠極難清除干凈，為了獲得一種有效的清除氣溶膠污染的方案，本研究在密閉超凈工作臺內霧化陽(yáng)性 PCR 產(chǎn)品，模擬了核 酸氣溶膠污染。然后分別測試了單獨使用84消毒液或核酸污染去除劑，以及75%乙醇/84消毒液或核酸污染去除劑/84消毒液的復合處理方案。結果顯示，未處理組熒光PCR Ct值為27.21，說(shuō)明密閉工作臺內模擬氣溶膠污染已經(jīng)非常嚴重，超過(guò)了一般實(shí)驗室核酸污染的程度 (Ct 值≥33)。單獨使用84消毒液處理一次，PCR Ct值僅提高到29.72，提示其僅能部分去除氣溶膠污染；單獨使用核酸污染去除劑處理一次能明顯去除氣溶膠污染，PCR Ct值提高至34.78，但仍有微量殘留；75%乙醇/84消毒液復合方案也能明顯地除氣溶膠污染，PCR Ct值提高至32.86，還有少量殘留，且去除效果略遜于單獨使用核酸污染去除劑；核酸污染去除劑/84消毒液復合方案僅處理一次就完全將超凈工作臺內的高 濃度氣溶膠污染清除干凈，提示該方案可用于實(shí)驗室核酸氣溶膠污染的清除 (圖 3)。
圖 3 熒光 PCR 鑒定不同策略去除氣溶膠的效果
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